匿名 查看了产品PEG-20M

? 聚乙二醇(PEG) ? 强极性键合交联固定相 ? 耐溶剂冲洗 ? 较低的20oC 温度下限是任何键合PEG 固定相的最低温度；改善低沸点分析物的分离度 ? 使用温度：-40至230℃ ?类似于：HP-INNOWax，DB-WAXetr，DB-WAX，Rtx-WAX，Stabilwax，CP-Wax 52 CB，BP-20 ? 近似等同于USP 固定相G16 ? 应用：可分析低沸点溶剂，TVOC，醇类，脂肪酸，香精类，溶剂，水样

长度内径膜厚规格货号价格操作15m0.25mm0.25μm15m0.25mm0.25μm0507071270.00购买15m0.25mm0.33μm15m0.25mm0.33μm0507081270.00购买15m0.25mm0.50μm15m0.25mm0.50μm0507101270.00购买15m0.32mm0.25μm15m0.32mm0.25μm0508071270.00购买15m0.32mm0.50μm15m0.32mm0.50μm0508101270.00购买30m0.25mm0.25μm30m0.25mm0.25μm0807071670.00购买30m0.25mm0.33μm30m0.25mm0.33μm0807081670.00购买30m0.25mm0.50μm30m0.25mm0.50μm0807101670.00购买30m0.32mm0.25μm30m0.32mm0.25μm0808071670.00购买30m0.32mm0.33μm30m0.32mm0.33μm0808081670.00购买30m0.32mm0.50μm30m0.32mm0.50μm0808101670.00购买50m0.25mm0.25μm50m0.25mm0.25μm1107072680.00购买50m0.25mm0.33μm50m0.25mm0.33μm1107082680.00购买50m0.25mm0.50μm50m0.25mm0.50μm1107102680.00购买50m0.32mm0.25μm50m0.32mm0.25μm1108072680.00购买50m0.32mm0.33μm50m0.32mm0.33μm1108082680.00购买50m0.32mm0.50μm50m0.32mm0.50μm1108102680.00购买60m0.25mm0.25μm60m0.25mm0.25μm1207073680.00购买60m0.25mm0.33μm60m0.25mm0.33μm1207083680.00购买60m0.25mm0.50μm60m0.25mm0.50μm1207103680.00购买60m0.32mm0.25μm60m0.32mm0.25μm1208073680.00购买60m0.32mm0.33μm60m0.32mm0.33μm1208083680.00购买60m0.32mm0.50μm60m0.32mm0.50μm1208103680.00购买15m0.53mm0.25μm15m0.53mm0.25μm0510071270.00购买15m0.53mm0.50μm15m0.53mm0.50μm0510101270.00购买30m0.53mm1.50μm30m0.53mm1.50μm0810143280.00购买30m0.53mm0.33μm30m0.53mm0.33μm0810082270.00购买30m0.53mm0.50μm30m0.53mm0.50μm0810102270.00购买50m0.53mm0.25μm50m0.53mm0.25μm1110073980.00购买50m0.53mm0.33μm50m0.53mm0.33μm1110083980.00购买50m0.53mm0.50μm50m0.53mm0.50μm1110103980.00购买60m0.53mm0.25μm60m0.53mm0.25μm1210074380.00购买60m0.53mm0.33μm60m0.53mm0.33μm1210084380.00购买60m0.45mm0.50μm60m0.45mm0.50μm1209104380.00购买25m0.25mm0.25μm25m0.25mm0.25μm0707071380.00购买30m0.25mm1.00μm30m0.25mm1.00μm0807121980.00购买30m0.53mm1.00μm30m0.53mm1.00μm0810122270.00购买50m0.32mm1.00μm50m0.32mm1.00μm115122680.00购买60m0.32mm1.00μm60m0.32mm1.00μm125123680.00购买30m0.32mm3.00μm30m0.32mm3.00μm085171980.00购买30m0.32mm2.0μm30m0.32mm2.0μm0808151980.00购买30m0.53mm2.0μm30m0.53mm2.0μm0810153280.00购买25m0.25mm0.33μm25m0.25mm0.33μm0707081380.00购买25m0.25mm0.50μm25m0.25mm0.50μm0707101380.00购买25m0.25mm1.00μm25m0.25mm1.00μm0707121700.00购买50m0.25mm1.00μm50m0.25mm1.00μm114122680.00购买15m0.32mm0.33μm15m0.32mm0.33μm0508081270.00购买15m0.32mm1.00μm15m0.32mm1.00μm0508121600.00购买25m0.32mm0.25μm25m0.32mm0.25μm0708071380.00购买25m0.32mm0.33μm25m0.32mm0.33μm0708081380.00购买25m0.32mm0.50μm25m0.32mm0.50μm0708101380.00购买25m0.32mm1.00μm25m0.32mm1.00μm0708121700.00购买30m0.32mm1.00μm30m0.32mm1.00μm0808121980.00购买15m0.53mm1.00μm15m0.53mm1.00μm0510121270.00购买15m0.53mm2.65μm15m0.53mm2.65μm0510161580.00购买25m0.53mm1.00μm25m0.53mm1.00μm0710121930.00购买30m0.53mm2.65μm30m0.53mm2.65μm0810163280.00购买30m0.53mm3.00μm30m0.53mm3.00μm0810173280.00购买50m0.53mm1.00μm50m0.53mm1.00μm1110123980.00购买50m0.53mm3.00μm50m0.53mm3.00μm1110174380.00购买60m0.53mm5.00μm60m0.53mm5.00μm1210195680.00购买20m0.32mm0.33μm20m0.32mm0.33μm1908081380.00购买30m0.32mm1.80μm30m0.32mm1.80μm0808271980.00购买30m0.53mm1.20μm30m0.53mm1.20μm0810463280.00购买30m0.53mm0.25μm30m0.53mm0.25μm0810072270.00购买20m0.32mm0.30μm20m0.32mm0.30μm1908031380.00购买60m0.25mm0.20μm60m0.25mm0.20μm1207053680.00购买50m0.25mm0.20μm50m0.25mm0.20μm1107052680.00购买? 聚乙二醇(PEG) ? 强极性键合交联固定相 ? 耐溶剂冲洗 ? 较低的20oC 温度下限是任何键合PEG 固定相的最低温度；改善低沸点分析物的分离度 ? 使用温度：-40至230℃ ?类似于：HP-INNOWax，DB-WAXetr，DB-WAX，Rtx-WAX，Stabilwax，CP-Wax 52 CB，BP-2阅读全文 

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匿名 学习了教材保留值  保留值是组分在色谱体系中的保留行为，反映组分与固定相作用力的大小，是色谱过程热力学特性的参数，有如下几种表示方式。
1.比移值
  比移值（Rf）是溶质移动距离与流动相移动距离之比，是平面色谱的基本定性参数［图7-1-1（a）］。为展开后的平面色谱示意图，Rf值以下式表示，见图7-1-1（a）。 因此，当Rf值为0时，表示组分留在原点未被展开，当Rf值为1时，表示组分随展开剂至前沿，即组分不被固定相吸附，所以Rf值只能在0-1之间，故均为小数。
2.高比移值
  为了避免Rf值为小数，有些文献以高比移值（hRf）代替Rf值来作薄层色谱的定性参数，Rf×100即为hRf值，故hRf值都是在Rf之间。
3.相对比移值
  相对比移值（Ri,s）是由于影响被分离物质在薄层上移动距离的因素较多，因此Rf值的重现性较差，如果将被分离物质与一参比物点在同一块薄层上，用相同的色谱条件进行分离，相对比移值就是被分离物质（s）和参比物（i）的Rf值之比，或是被分离物质（s）和参比物i在薄层上移动距离之比，见图7-1-1（b）。由于参比物的Rf值或移动距离可大于或小于被分离物质的Rf值或移动距离，因此相对比移值可大于或小于1，但其重复性及可比性均优于Rf值。相对比移值以下式表示：
4.保留常数值
  保留常数值（Rm）与化合物的Rf值之间或与被分离化合物结构之间存在下述关系：
因此利用上式，可以推测同系物的Rm值或鉴定同系物。
5.环形展开比移值
  在环形展开时的比移值以Rfc或RRf表示，RfC
值为被分离物质由原点移动的半径与展开剂由原点移动至前沿半径的比值，由于在直线展开时的移动距离与环形展开的半径的平方根
相当，因此环形展开适用于Rf值小的化合物，而且原点最好离环心尽量近些，这样展开后的斑点集中、分离度好。
  如果实验条件完全一致，比移值应该是组分的定性技术参数，但事实上由于影响平面色谱的因素很多，故Rf、hRf、Ri,s及Rm都不是一个稳定的数值，只有在已知对照品随行并用不止一种展开剂进行展开后，被分离组分的比移值与对照品完全一致时，才可作为定性指标之一。  保留值是组分在色谱体系中的保留行为，反映组分与固定相作用力的大小，是色谱过程热力学特性的参数，有如下几种表示方式。1.比移值  比移值（Rf）是溶质移动距离与流动相移动距离之比，是平面色谱的基本定性参数［图7-1-1（a）］。为展开后的平面色谱示意图，Rf值以下式表示阅读全文 

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匿名 查看了产品ZORBAX SB-C18

在低pH 条件下的（低达pH 1）分离时，具有最长的色谱柱寿命和最佳的重现性
专利的稳定色谱柱化学允许在高温和低pH 条件下使用，而不会降解
六种不同的键合固定相提供了广泛的选择性- SB-C18、SB-C8、SB-CN、SB-Phenyl、SB-C3
和SB-Aq
高纯度（B 型）硅胶可获得良好峰形

Agilent ZORBAX StableBond 色谱柱使用专利的、独特的、单官能团硅烷，其具有较大的二异
丁基(SB-C18) 或二异丙基（SB-C8、SB-C3、SB-Phenyl、SB-CN 和SB-Aq）侧链基团，空间
位阻关键的硅氧烷键合到硅胶表面，以避免在低pH 条件下水解破坏。为了在酸性流动相条件
下提供良好的稳定性并使寿命最长，重现性最佳，StableBond 填料不封端。高纯度、低酸度
的硅胶为酸性、碱性和中性化合物提供了出色的峰形，因此使得StableBond 色谱柱成为低pH
方法开发的首选。ZORBAX StableBond 色谱柱可与所有常用流动相兼容，包括水含量很高的
流动相。

长度内径粒径规格货号价格操作150mm4.6mm其他150mm4.6mm其他1313205395.00购买 在低pH 条件下的（低达pH 1）分离时，具有最长的色谱柱寿命和最佳的重现性 专利的稳定色谱柱化学允许在高温和低pH 条件下使用，而不会降解 六种不同的键合固定相提供了广泛的选择性- SB-C18、SB-C8、SB-CN、SB-Phenyl、SB-C3和SB-Aq 高纯度（B 型）阅读全文 

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匿名 学习了教材强健性(Robustness)15.9  强健性(Robustness)    国际协调会(ICH)[6]已将分析步骤的强健性定义为“方法被微小的、但有意的参数改变对结果影响的承受能力"。一种良好的办法为系统地改变方法中的重要参数，然后测定它们对分离的影响。例如，如果一个方法使用36% ACN/水作流动相，那么用33、36与39% ACN/水进行分析，测定流动相对保留值和选择性的影响，则有助于确定有机溶剂含量比例变化对该方法的影响力。应对所有变量（如流动相添加剂、柱温、流速等；见图l-5所示）进行类似的研究。如果像第6—9章所推荐进行分离变量的系统研究，恨多数据可在方法建立过程中获得。在定义强健性时，使用参数作图步骤特别有效（见10.6节）。    强健性最重要的方面是建立能预测分离参数变化对结果影响的方法。例如两组分在pH 3.0和pH 4.5时的分离相当，但在pH 3．O时，pH变化±0.1，分离的变化则很大（而pH 4.5时则不大），那么选择pH 4.5就较好?？疾旆椒ㄇ拷⌒缘挠行О旆ㄊ怯猛臣蒲笛樯杓?，同时评估多个参数。适宜的设计方案能够最大限度地减少所需实验的次数，并仍能提供有关各个参数影响结果的信息。一般首先应对可能影响方法的所有已知因素或怀疑因素进行多变量筛选研究。在第一步研究中，简明地检查怀疑因素，以确定哪些因素对本方法的影响较大。首次研究的结果将表明只有这些因素重要。第二步是对这些重要因素进行更详细地评估，～般对每个因素部用三水平实验。该研究结果能给出每个因素对定量的影响。在方法建立中运用实验设计超出了本书的范围，不过，有关一般实验设计的详情可以参见文献14~17。另外，应用计算机模拟（如Dry-Lab）对测定方法的强健性影响也很有用（见10.2和10_6节）。    注意上述的考虑将大大改善最终方法的质量。然而色谱柱是个例外。不同生产批号的色谱柱有可能使所有样品成分的保留值不能重现，甚至使分离结果不可接受。因此，在方法建立和论证过程中，至少应对三个不同批号的色谱柱进行评估，确保能得到重现性好的色谱柱，这一点十分重要。如果发现样品保留值有明显的批次差异时，应采取适当的措施，以避免将来发生问题o一种方法是储存足够的“好”批号的色谱柱，以备将来该方法使用。另一种方法是测定是否能通过微小地改变色谱条件(%B、温度、pH等)，减少或纠正批次间保留值的任何不良变化。
15.9  强健性(Robustness)    国际协调会(ICH)[6]已将分析步骤的强健性定义为“方法被微小的、但有意的参数改变对结果影响的承受能力"。一种良好的办法为系统地改变方法中的重要参数，然后测定它们对分离的影响。例如，如果一个方法使用36% ACN/水作流动相，那么用33、36与39% ACN阅读全文 

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匿名 查看了产品Sephadex G-25

葡聚糖系类凝胶柱，操作范围pH值：2-13，短时清洗范围pH值：2-13，主要用于脱盐及交换缓冲液，去除小分子杂质。

葡聚糖系类凝胶柱，操作范围pH值：2-13，短时清洗范围pH值：2-13，主要用于脱盐及交换缓冲液，去除小分子杂质。 阅读全文 

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匿名 学习了教材色谱峰不对称性（拖尾因子）

理想状态下，所有的色谱峰应该是对称的（呈高斯状态分布）。

但是由于仪器系统死体积的存在，以及仪器部件和固定液对样品的吸附效果，导致色谱峰经常出现“前伸”和“拖尾”的情况。

拖尾是指如图所示的色谱峰尾部（图中B）比前部的距离大。

前伸与拖尾情况相反，是指色谱图中色谱峰前部（图中A）比尾部距离大。

 

因为不对称的色谱峰导致在测量色谱峰面积时重复性和准确度较差，所以会导致分离和定量方面出现问题。

 

通常情况下，定量分析时，对色谱峰的不对称性预设一个数值，当不对称性超过这个数值时，就可以认为结果不可靠，不能采用。

理想状态下，所有的色谱峰应该是对称的（呈高斯状态分布）。 但是由于仪器系统死体积的存在，以及仪器部件和固定液对样品的吸附效果，导致色谱峰经常出现“前伸”和“拖尾”的情况。 拖尾是指如图所示的色谱峰尾部（图中B）比前部的距离大。 前伸与拖尾情况相反，是指色谱图中色谱峰前部（图中A）比尾部距离大。   因为不对称的色谱阅读全文 

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李飞 回答了问题气相色谱如何选择试样的溶剂？

在选择的时候首先具有良好的溶解性和与目标物质的良好分离性能。检测器、柱子有特殊要求的亦要考虑，对于峰形，您应该考虑目标的浓度?！ご矸椒ā⑷肓俊髡藕潘ゼ鹾推渌蛩?。通常色谱柱对水敏感并会损坏色谱柱，因此尽量不要含水。此外，为了不干扰测量，通常溶剂具有较低的沸点，并且峰值位于前面。使用得多的是正己烷，沸点较低的溶剂如氯仿，丙酮，正己烷等。甲醇和水是不利的色谱柱的使用寿命。

在选择的时候首先具有良好的溶解性和与目标物质的良好分离性能。检测器、柱子有特殊要求的亦要考虑，对于峰形，您应该考虑目标的浓度。——预处理方法——注入量——调整信号衰减和其他因素。通常色谱柱对水敏感并会损坏色谱柱，因此尽量不要含水。此外，为了不干扰测量，通常溶剂具有较低的沸点，并且峰值位于前面。使用得多的是正己烷，沸点较低的溶剂如氯仿，丙酮阅读全文 

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匿名 查看了产品GDX-102

GDX-102 的详细资料如下：

名称

组成

颜色

堆密度/g·ml-1

比表面

极性

最高使用温度/℃

主要分析用途

/m2·g-1

GDX-102

二乙烯苯、苯乙烯等共聚物

白

0.2

680

非极性

270

高沸点物质

 

长度外径目数材质规格货号价格操作2m3mm60-80目不锈钢2m3mm60-80目不锈钢0020-04030302780.00购买2m3mm80-100目不锈钢2m3mm80-100目不锈钢0020-04030402780.00购买2m4mm60-80目不锈钢2m4mm60-80目不锈钢0020-04050302880.00购买2m4mm80-100目不锈钢2m4mm80-100目不锈钢0020-04050402880.00购买3m3mm60-80目不锈钢3m3mm60-80目不锈钢0020-050303021080.00购买3m3mm80-100目不锈钢3m3mm80-100目不锈钢0020-050304021080.00购买3m4mm80-100目不锈钢3m4mm80-100目不锈钢0020-050504021230.00购买1m3mm80-100目不锈钢1m3mm80-100目不锈钢0020-0303042500.00购买3m4mm60-80目不锈钢3m4mm60-80目不锈钢0020-050503021230.00购买4m3mm60-80目不锈钢4m3mm60-80目不锈钢0020-070303021480.00购买4m3mm80-100目不锈钢4m3mm80-100目不锈钢0020-070304021480.00购买4m4mm60-80目不锈钢4m4mm60-80目不锈钢0020-070503021680.00购买4m4mm80-100目不锈钢4m4mm80-100目不锈钢0020-070504021680.00购买5m3mm60-80目不锈钢5m3mm60-80目不锈钢0020-080303021880.00购买5m3mm80-100目不锈钢5m3mm80-100目不锈钢0020-080304021880.00购买5m4mm60-80目不锈钢5m4mm60-80目不锈钢0020-08050321530.00购买5m4mm80-100目不锈钢5m4mm80-100目不锈钢0020-08050421530.00购买6m3mm60-80目不锈钢6m3mm60-80目不锈钢0020-090303022100.00购买6m3mm80-100目不锈钢6m3mm80-100目不锈钢0020-090304022100.00购买6m4mm60-80目不锈钢6m4mm60-80目不锈钢0020-090503022400.00购买6m4mm80-100目不锈钢6m4mm80-100目不锈钢0020-090504022400.00购买2m3mm60-80目玻璃2m3mm60-80目玻璃0020-04030311080.00购买2m3mm80-100目玻璃2m3mm80-100目玻璃0020-04030411080.00购买2m4mm60-80目玻璃2m4mm60-80目玻璃0020-04050311180.00购买2m4mm80-100目玻璃2m4mm80-100目玻璃0020-04050411180.00购买3m3mm60-80目玻璃3m3mm60-80目玻璃0020-05030311380.00购买3m3mm80-100目玻璃3m3mm80-100目玻璃0020-05030411380.00购买3m4mm80-100目玻璃3m4mm80-100目玻璃0020-05050411530.00购买3m4mm60-80目玻璃3m4mm60-80目玻璃0020-05050311530.00购买2m3.2mm60-80目不锈钢2m3.2mm60-80目不锈钢0020-04040302850.00购买2m3mm80-100目岛津不锈钢2m3mm80-100目岛津不锈钢0020-04030403980.00购买3m4mm60-80目岛津不锈钢3m4mm60-80目岛津不锈钢0020-050503031430.00购买2m3.2mm60-80目钝化不锈钢2m3.2mm60-80目钝化不锈钢0020-04040351050.00购买4m3.2mm60-80目钝化不锈钢4m3.2mm60-80目钝化不锈钢0020-07040351820.00购买2m3mm60-80目岛津不锈钢2m3mm60-80目岛津不锈钢0020-04030303980.00购买2m1/16英寸60-80目不锈钢2m1/16英寸60-80目不锈钢0020-040903021280.00购买GDX-102 的详细资料如下：名称组成颜色堆密度/g·ml-1比表面极性最高使用温度/℃主要分析用途/m2·g-1GDX-102二乙烯苯、苯乙烯等共聚物白0.2680非极性270高沸点物质 长度外径目数材质规格货号价格操作2m3mm60-80目不锈钢2m3mm60-80目不锈钢0020-04030302780.00购买2m3m阅读全文 

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匿名 学习了教材尺寸排阻色谱法11.4  尺寸排阻色谱法    尺寸排阻色谱法(SEC)以水缓冲液为流动相，常被称作凝胶渗滤色谱法oSEC广泛用于生物大分子，尤其是蛋白质的分离和表征鉴定。与本书中讨论的其它HPLC模式不同，这种分离模式要求吸附到固定相上的样品分子应尽可能少。这由于两个重要原因：(I)SEC是使样品变性、同收率降低可能性最小的HPLC方法；(2)系统方法建立要比RPC、JEC或HIC都简单（或有很大不同）。鉴于这些原因，我们在本节中简单讨论SEC，仅强调其通用性而非具体应用。详情可见文献5，8. 61和62。11.4.1  SEC保留的基础    图II - 22a为样品分子大小和柱填料子L径对SEC保留的影响示意图o(a)图中填料的孔径以微?；剩ㄐ毕咭跤扒颍┘涞目瞻浊虮硎尽Ｊ敌那蚍直鸨硎玖街植煌难贩肿?。较大的球形分子无法进入填料孔内，称作被填料排阻。而小分子则能够进入到网扎内，因此在流动相中需多停留一段时间，保留值较大。    图11 - 22 6为样品分子大小不同的SEC保留机理示意图。本例中，二分子均足够小，都能进入到填料孔中，但即使如此，由于小分子进出较多，保留倾向较大。样品分子在流动相与色谱柱填料之间的分配决定于能够进到两相中的有效分子中心的体积。在柱填料中的该体积越大，保留值就越大。小分子的中心能更贴近孔边缘，所“有效体积较大。图11 - 22b中的二分子的有效体积分别以微孔内部的虚线表示。小分子在固定相中有较大的有效体积，填料内部的这种分子相对较多，因此小分子比大分子晚流出色谱柱。    SEC的分离决定于(I)与分子大小有关的保留值，(2)柱效与峰宽。如图11 - 22所示，保留值与分子的大小和柱填料的孔径有关。这一关系可用样品的对数分子量与保留时间或（更好是）保留体积作图表示。图11 - 23a所示为一假想的校正曲线。分子量大子某值（本图中约10，）的样品分子完全被排除于填料微孔之外，其保留体积VR=Vo(等于色谱柱内微粒间的体积)。而分子量小于某值（本图中约103）的分子则可完全进入到微孔中（完全渗透），保留体积( Vo+V)=Vm。(a)下面的色谱图说明了这种关系。C峰的保留体积为vo（完全排阻），而且任何分子量大于105的化合物都将与c组分峰重叠在一起，（即排阻于填料之外的组分，不可能彼此分开）o同样，F峰保留时间为(%+V)，所有分子量小于103 的化合物都将与F峰重叠。图Il - 23a中的D和E化合物具有不I司的分子量和不同的保留体积，因而能根据分子大小被分离。在排阻与完全渗透之间的分子量范围（图11 - 23 n中为l0%5-105)可作为该色谱柱填料的分级范围。    建立SEC方法时，应选择分级范围能覆盖所有样品组分分子量的色谱柱。图ll - 23 b给出了几种SEC色谱柱的分级范围（葡聚糖标准品作样品）。小孔填料(12sA)分级范围约为200—2×104，而大孔填料(l000A)有约105至更大(≈107)的范围。SEC柱供货商一般提供所售色谱柱的校正曲线。    图11 - 23 c和d所示为在两支孔径分别为2soA和450A的色谱柱上，以数种蛋白为样品得到的校正曲线?？招脑参捎玫鞍撞槐湫缘牧鞫嗟慕峁?，实心圆为变性流动相的结果。得到的分级范围为：    在蛋白不变性条件下，分子量高达4百万道尔顿的蛋白质可以在孔径450A色谱柱上分离。但采用使蛋白变性的流动相（6M盐酸胍）可使这些蛋白结构展开，增加了它们在SEC分离中的有效尺寸（溶质流体动力学直径）o从图11 - 23 c和d的曲线离散情况看，SEC保留与分子量的关系的规律性不很好。除11.4.4节中讨论的“非理想”影响外，由SEC保留值推断的分子表观大小不仅与分子量有关，也与分子的形状有关。因此，由于葡聚糖分子的形状（线性）与天然蛋白质分子的形状（球形）不一样，葡聚糖标准品的校正曲线与天然蛋白（色谱柱相同）不同。有关保留值与分子形状的深入讨论，请参阅文献61和64。    图11 - 24所示为填料子L径对SEC分离四种分子量不同的蛋白混合物的影响。在小孔径Sephacryl S- IOOHR上分离时（a），158 -和440 - kDa蛋白在近%处流出（排阻作用），分离度不好。在大孔S一500HR填料上的分离时(c)，所有谱峰移向全渗透，三种大蛋白质的谱峰重叠在一起。而用中间孔径尺寸的填料S一300HR则使该样品很好地分离，甚至包括大分子量的杂质I也得以分离。．『1.4.2应用    SEC被认为是一种分辨率不高的HPLC方法，因为色谱图中的所有谱峰必须落在一个狭窄的保留范围内[ Vo VH Vo+v,)]。在SEC分离中通?？床坏轿濉⒘鲆陨系姆宕锏交叻掷氲那榭?。因而，SEC用于分析复杂的生物样品不多，需用IEC，尤其是RPC作日常分离。SEC通常应用于下列领域：    1预分离复杂样品，然后再使用高分辨率的HPLC方法(IEC、HIC、RPC等）分离或纯化蛋白质2分析纯化蛋白质样品，以确认二聚体、三聚体或其它聚合种类的存在    3由校正曲线估计蛋白质的分子量，如图11 - 23 c和d图II - 25a所示为SEC预处理来分离相关蛋白的示例。样品为三种蛋白，F、HN和HN-。以SEC收集适宜的馏分，粗分需要的蛋白组分，然后再用IEC、HIC或RPC进一步纯化。    图11 - 25 6所示为重组人生长激素（thCH）降解产物的SEC分析。本例中，单元蛋白从二聚体及多聚体中很好分离出，可以估计蛋白质聚集的程度。图11  - 25c说明高分辨率分离人血清样品（虚线）和已知血中存在的几种蛋白的色谱图l~5。本分离中至少有6种成分被部分分离。11.4.3  SEC分离的优选条件    SEC方法建立包括下列选择：    ·色谱填料：孔径尺寸；键合硅胶与聚合物    ·流动相    ·色谱柱条件    ·色谱柱尺寸    孔径大小的选择前面已讨论过。如果开始时孔径尺寸选择不当，在首次分离中即可确认（如图11 - 24a或c）。键合相硅胶填料的粒径较小，其柱效比聚合物高得多D小尺寸的硅胶基质填料与类似的琼脂糖基质填料及聚合物填料相比，在高流速条件下物理稳定性更高，可减少样品的分析时间，硅胶基质填料是分析型SEC分离的首选。商品聚合物填料一般颗粒较大，用高pH流动相时更稳定，可能更适用于大规模的制备分离。由加锫稳定的硅胶制成的SEC填料（Zorhax CF - 250，GF - 450）也可使用高达8.5的pHj23]。流动相的选择由两方面因素决定：1．与蛋白样品兼容．2．样品与柱填料相互作用小。11.4.4全面讨论后一种因素。一般说来流动相由0.1—0.2M水缓冲液制得。最佳pH随色谱柱与样品不同面异，大多数分离可在pH6—8范围内进行。    色谱柱条件指：柱长，微粒大小和流速。一旦选定了满意的柱填料孔径，通过选择流动相组成使样品一填料间的相互作用减至最小，那么进一步改善SEC分离的唯一途径是增加色谱柱效Ⅳ（增加柱长，减小微粒尺寸，降低流速；见2.3.3.2节）。    SEC色谱柱尺寸的选择与所限定的样品保留值范围有关(k O)，这意味着其它因素相同时，峰窄于其它的HPLC模式。窄峰易于检测，但也更易受（不理想的）柱外谱峰展宽因素的影响。因此，分析型SEC色谱柱通常的内径为0.8一1．Ocm，以增大所有峰的体积，尽量降低柱外效应。用内径0.8~1．Ocm的色谱柱，多数情况流速为0.5—2ml/min。直径大的色谱柱可用于大量样品的制备分离。11.4.4  常见问题与解决方案    SEC分离中最为严重的问题由样品与柱填料之间发生作用而引起。这些相互作用由硅胶基质填料中存有硅羟基或疏水样品一填料结合而产生。对SEC分离中硅羟基作用的影响见图11 - 26的说明。流动相pH 5时，硅羟基电离，柱填料带负电；在SEC分离的一般条件下pH(6—8)，这些电离的硅羟基能带来两种与电离样品分于的作用：静电排斥和IEC保留。当样品分子带负电荷，流动相中缓冲液浓度低时，发生静电排斥。因而，样品受带负电填料的孔穴的排斥。图Il - 26a所示为一假想的样品与填料之间无相互作用（排斥或吸引）的分离。如发生静电排斥，分离情况变为图11 - 26 6。样品组分靠近排阻位置被洗脱出，分离度较差。增大流动相离于强度可中和这种排斥作用，使分离得到改善。另外，降低pH，即减少蛋白分子与色谱柱上的负电荷，也能降低静电排斥，协助解决图1 1- 26 b的问题。    如蛋白分子带正电，能通过离子交换保留于电离的硅羟基上。这一影响将导致较小蛋白流出较晚（k 0），如图11 - 26c中所示。增加缓冲剂浓度和／或提高pH，以减少蛋白质的正电荷，可减小离子交换保留。(c)分离实际上比(a)好，当SEC中发生离子交换作用时情况常如此。最好还是避免这种作用。因为分离变得难以预测，后面的谱峰可能会严重拖尾，样品回收率也会受损。然而，利用蛋白吸引到带反电荷的色谱柱填料上设计的IEC柱，分离应更好。    因为样品与柱填料之间的疏水作用，图11 - 26 c中的SEC分离也可发生。这种情况下，增加缓冲剂浓度将使后面谱峰流出更慢，加剧该过程。在流动相中加入5一IO%丙醇可减小疏水作用。11.4.5  蛋白折叠    由于得到重组蛋白已不再困难，近年来用SEC鉴别蛋白折叠模式与中间体的研究备受关注。图11 - 27所示为在平衡变性条件下，SEC分离活性和变性溶菌酶的示例。SEC分辨折叠与变性多肽以及（偶然）折叠中间体的能力，能够对蛋白溶液中每种组分的浓 11.4  尺寸排阻色谱法    尺寸排阻色谱法(SEC)以水缓冲液为流动相，常被称作凝胶渗滤色谱法oSEC广泛用于生物大分子，尤其是蛋白质的分离和表征鉴定。与本书中讨论的其它HPLC模式不同，这种分离模式要求吸附到固定相上的样品分子应尽可能少。这由于两个重要原因：(I)SEC是使样品变性、同收率降低可能性最阅读全文 

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