高效液相色谱法

　　色谱法具有许多明显的优势，可以在各种条件下获得一对手性化合物，可以满足分离和测量的要求。它可以进行简单快速的定性和定量分析，也可以进行制备规模的分离和微量测量。

　　色谱法已成为最有用的光学分割方法。这些方法包括高效的液相色谱法.气相色谱法.薄层色谱法.超临色谱法.毛细管电泳和逆流色谱-离心分配色谱法。其中，高效液相色谱法不会因高温而改变溶质结构，失去生物活性，柱的容量高，可以发展成实验室和工业规模来分离映射系统的制备。

　　根据其原理，液相色谱法可分为以下三种类型

　　(1)手性衍生法

　　优点:分离条件比较简单，只需要普通的HPLC色谱分离条件可以提高检测(紫外或荧光)的灵敏度。

　　缺点：需要高纯度的衍生试剂，每对映体的衍生速率不同。

　　(2)手性流动相法

　　优点：柱前不需要衍生，对色谱柱填料没有特殊要求。

　　缺点：添加剂选择不当会干扰溶质的检测，可拆分化合物有限。

　　(3)手性固定相法

　　优点：制备方便，适用于各种化合物的分割。

　　缺点：目前还没有广谱色谱固定相，需要根据样品的结构选择合适的手性柱。

　　结论：手固定相法仍然是目前最具优势的光学异构体分割方法。到目前为止，这种方法已经分为几十种类型.在过去的100年里，成千上万种手性化合物的对映体超过了分离手性化合物对映异构体的总和。

　　综上所述，高效液相色谱仪和手性色谱柱广泛应用于手性分离领域。

　　这几年我们用的是液相和色谱柱，大大小小的问题估计也遇到了很多，

　　所以在使用液相色谱的过程中，如何处理各种问题？

　　不用担心，研创手性科技总结了一些解决方案，消除了你脑中的问号！

　　压力

　　1.常见的仪器现象

　　压力升高.降低或不稳定

　　2.原因分析

　?、僖潜砉艿蓝氯?；

　?、谛孤?流动相抽空.溶剂管滤芯堵塞；

　?、巯低持杏衅?；

　　3.应对方法

　　①对从泵到检测器进行系统检查，确定堵塞部位；

　?、诩觳槊扛鼋涌冢觳榱鞫?，超声清洗或更换溶剂管滤芯；

　　③使用前超声流动相，排气。

　　1.色谱柱常见现象

　　柱头塌陷，反压上升，柱效下降

　　2.原因分析

　?、偃绻魉俟?，会导致高柱压或柱压上升过快，尤其是使用高粘度溶剂(如IPA,EtOH）；

　?、诹鞫嗷蜓啡芤汗瞬怀沟?，固体颗粒堵塞管道或柱头，会造成柱压过高；

　?、墼谥烦恋砘蚯苛椅窖分械某煞郑岬贾轮股?。

　　3.应对方法

　　①如果柱前使用粘度高的溶剂导致柱压升高，建议先用小流速更换以前的溶剂，待柱压降稳定后再进样检测；

　　②由于柱压问题导致柱头塌陷，无法恢复柱的性能，出现异常后可尝试反色谱柱进行实验；

　?、勖扛鲋佣加刑囟ǖ难沽Ψ段В氩慰枷嘤Φ纳字得魇?；

　　④在更换流动相时，或将柱子刚刚连接到仪器时，逐渐增加流速；

　?、荻粤鞫嗪脱啡芤航谐沟坠?；

　　⑥样品预处理；

　?、咭瞧魃柚帽；ぶ沽?。

　　基线

　　1.色谱柱常见现象

　　基线漂移.基线噪音大

　　2.原因分析

　　①柱温变化；

　　②流动相混合不均匀；

　　③流通池污染或气泡；

　?、苌字胶饣郝?，特别是流动相组成发生较大变化；

　?、萋┮?；

　?、奚字廴?。

　　3.应对方法

　?、倏刂剖笛槭椅露群椭孪湮露龋?/p>

　?、谑褂肏PLC溶剂、高纯盐及添加剂、流动相在使用前进行脱气；使用前轻轻摇动瓶子，使流动相均匀；

　?、凼褂们扒逑戳魍ǔ?、流动相脱气；

　?、芟扔弥械惹慷鹊娜芗脸逑粗?；

　?、葑⒁庋沽Γ懦┮旱牡胤?；

　?、抻们肯赐讶芗?在柱使用范围内)定期冲洗柱子。

　　峰型

　　一.峰峰的常见现象

　　1.原因分析

　?、俜迩把厥怯芍乱鸬?；

　　②样品溶剂与流动不兼容；

　?、凵字岸寺送宥氯?；

　　④柱效降低；

　?、葜匪?。

　　2.应对方法

　?、儆惺碧岣呶露瓤梢韵把?；

　?、谟昧鞫嗳芙庠黾恿鞫嗉曰蜓罚?/p>

　?、鄹簧赴?。如果前延峰很快再次出现，注意检查颗粒物(样品、流动相、泵、进样阀)的来源

　?、芙ㄒ槭褂帽；ぶ逑瓷字蚋簧字?；

　　⑤更换色谱柱。

　　二.峰峰型的常见现象

　　1.原因分析

　?、傺烦?；

　?、谠又史甯扇牛?/p>

　?、酃梏腔饔?；

　　④洗脱强度不够；

　?、葜馓寤蛑馓寤?；

　?、拗Ы档?；

　　⑦柱头塌陷

　　2.应对方法

　?、俳档脱凡裳炕蛳∈脱放ǘ?；

　　②纯化样品或调整流量比例，使杂质不干扰主峰；

　?、酃梏腔饔?；

　　④在柱可用溶剂范围内增加洗脱强度；

　?、菁跎倭拥慵湎?，尽量选择细管；

　?、藿ㄒ槭褂帽；ぶ逑瓷字蚋簧字?；

　?、吒簧字?/p>

　　三.肩峰是峰型常见现象

　　1.原因分析

　?、偕字虮；ぶ肟谖廴?；

　　②样品溶剂与流动不兼容；

　?、鄹扇欧?；

　　④色谱柱损坏。

　　2.应对方法

　　①用强溶剂清洗色谱柱或更换色谱柱，必要时可反冲，更换?；ぶ?；

　?、谟昧鞫嘞∈脱?；

　?、劭赡苁茄分写嬖诘奈镏视肽勘甓韵竺挥蟹掷耄枰髡椒ǎǖ髡鞫锥位蚋簧字├锤谋溲≡裥?，可能是通过空白溶液引入系统的污染物；

　?、芨簧字?。

　　误进溶剂

　　1.常见现象

　　柱压剧增，分离突然变差

　　2.原因分析

　　①涂敷型产品（Y1-Y5)如果导入错误的溶剂(如二氯甲烷).四氢呋喃.乙酸乙酯.甲苯等)，立即破坏柱子；

　　②正相手性柱和常用流动相的保存溶液含有大比例的正己烷，而正己烷和甲醇.乙腈.水的互溶性很差，如果没有适当的溶剂置换，柱压也可能被破坏，因为柱子中原有的溶剂不溶于溶剂。

　　3.应对方法

　?、偃芗烈坏┪笥茫指粗有阅艿目赡苄院艿?；

　　②立即停止泵，取下立柱，先用合适的溶剂(如乙醇)更换仪器前的溶剂，然后用立柱低速冲洗(至少20倍立柱体积)更换立柱中的误溶剂。

　　残留效应

　　1.常见现象

　　方法再现性差

　　2.原因分析

　?、僭谄胀鞫嘀?，残留物可长期稳定保留，“老化”柱子；

　?、谑笛楹笾逑床缓?。

　　3.应对方法

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　?、谟谩熬芍痹谛轮媳匦肴啡峡⒎椒ā?/p>

　　最后，提供研究和创造筛选柱流程图和正/反相手动柱包装