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潮霉素B（液体） 怎么用
货号：H8080
规格：1g
品牌：Germany
分子式 : C20H37N3O13
分子量 : 527.52
储存条件 : 2-8℃
外观（性状） : 澄清或轻微浑浊黄色溶液
单位 : 瓶 【详细说明】
潮霉素B（液体） 怎么用
货号：H8080
规格：1g
品牌：Germany
分子式 : C20H37N3O13
分子量 : 527.52
储存条件 : 2-8℃
外观（性状） : 澄清或轻微浑浊黄色溶液
单位 : 瓶
潮霉素B(HygromycinB )是由吸水链霉菌（Streptomyceshygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制蛋白质合成而杀死细菌、真菌和高等真核细胞。潮霉素B通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成。目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。
潮霉素B的应用：
1）筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核细胞或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）；
2）由于作用模式的差异，常与G418（GeneticinTM），Zeocin 和blasticidin S联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株
3）抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效；
4）作为驱虫药加入动物饲料；哺乳动物细胞选择的有效浓度通常是50 g/ml-1 mg/ml之间；对于植物细胞，其有效浓度是20 200 g/ml；对于细菌，有效浓度是20 200 g/ml；对于真菌，有效浓度是200 g 1 mg/ml。
化学性质：
潮霉素B是微黄褐色无定形粉末，有特殊气味，熔点160-180℃。为弱碱，易溶于水、甲醇、乙醇，易与许多有机酸和无机酸生成盐。
保存方法：溶液直接存放在2℃～8℃，至少存放1年。
蛋白质合成抑制剂，可用于植物细胞培养等生化研究。
潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。
大肠杆菌（ Escherichia coli.）来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418 (Cat：G8161)，Zeocin （Cat：Z8020）和Blasticidin S（Cat：B9300）联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因为病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。
本品是无菌的潮霉素B溶液（100mg/ml），可直接用培养液稀释使用。
使用方法
1. 常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000 g/mL。对于*次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定zui佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500 g/mL；细菌/植物细胞20-200 g/mL；真菌300-1000 g/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素zui低浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。
1） *天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过一夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2） 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000 g/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
终浓度（ g/mL）
培养基体积（ml）
5mg/ml潮霉素B加入体积（ml）
50
9.9
0.1
100
9.8
0.2
250
9.5
0.5
500
9.0
1.0
750
8.5
1.5
1000
8.0
2.0
3） 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4） 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5） 按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的zui低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1） 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果zui好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，zui好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2） 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3） 筛选7天后观察并评估细胞克?。洌┑男纬汕榭觥＜涞男纬煽赡芑剐枰恢芑蛘吒嗟氖奔?，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4） 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5） 之后更换正常培养基培养即可。
注意事项
1） 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了来自E. Coli.之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2） 本品为有毒化合物，避免与皮肤和眼睛接触，请小心操作。
3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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潮霉素B（液体） 怎么用订购说明：
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3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化，若有变动以订货当日zui新价格为准。
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运输说明：
1、极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来，再用泡沫盒密封，胶带层层粘住泡沫盒，放入索莱宝专用的箱子，然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
2、低温产品：低温产品运输过程中加装索莱宝专用冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来，再使用泡沫盒密封，用胶带严实密封泡沫盒，再放入索莱宝专用的箱子（保温效果zui少可以持续一周），然后交付给合作快递，安全快速高效放心的送至客户的手中，保证产品的性质稳定如一，为您的实验保驾护航。
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