色谱法

色谱法是许多纯化方案的核心并拥有一些共同的特征。首先，目的
蛋白溶解在流动相里，通常是缓冲水溶液中。溶液通常来源于细胞提取
物并且可以直接用于色谱分离。当流动相通过树脂(固定相)时，根据蛋
白质功能基团及物理性质的不同，固定相可以选择性的吸附分子。物理
性质包括电荷、分子质量、疏水性和配体亲和力。固定相的选择与纯化
的蛋白质性质密切相关。

色谱的基本原理是一根柱子，柱子中填充树脂，上样之前用缓冲液
来平衡树脂。样品进入柱子，依赖蛋白质和树脂上的功能基团之间的相
互作用的不同来分离。这些相互作用会降低一种或几种蛋白质通过柱子
的时间，而其他蛋白质不受阻碍。这样速度较快的通过柱子的蛋白质就
和其他剩余的蛋白质分离开来。有些时候蛋白质混合物与功能基团的相
互作用不同，强的相互作用使其流过柱子的速度变慢，弱的相互作用使
其稍微快一些，而没有相互作用使其流过树脂毫无阻力。

蛋白质溶液在流动相和固定相之间平衡伴随着溶液以阶梯式从塔板
到塔板在柱子中流过。柱子的分辨率会随着理论塔板数的增加而增加，
实际上，有很多增加理论塔板数的方法，如增加柱子的长度，减小填料
颗粒的尺寸。增加分辨率的值是为了使两种相似的流动的溶质以合理的
效率分开。

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