糖酵解系列试剂盒己糖激酶（HK）测试盒
货号：BC0740
规格：50管/48样
 

测定意义
    HK（EC 2.7.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是葡萄糖分解过程中的*个关键酶，催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。

测定原理
     HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品
    紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制
提取液：60mL 1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 30mL 1 瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂 1 瓶，4℃保存；临用前加入 30mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂 4℃
保存一周；
试剂三：液体 5 mL 1 瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂 1 支，-20℃保存，临用前加入 4mL 蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂 4℃
保存一周；
试剂五：粉剂 1 支，-20℃保存；临用前加入 2mL 蒸馏水充分溶解备用；现配现用；
试剂六：粉剂 1 支，-20℃保存；临用前加入 250 L 试剂一和 250 L 蒸馏水充分溶解备用；
用不完的试剂 4℃保存一周；

样本的前处理
1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量
（10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，
加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长 340nm，蒸馏水调零。
2、 将试剂一、二、三、四和五 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热 10 分钟。
3、 加样表：

将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中，立即混匀，加样本的同时开始计时，在 340 nm
波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度 A2，计算 A=A2-A1。
 

注意事项
1、如果一次性测定样本数较多，可将试剂一、二、三、四、五和六按比例配成混合液，预
热 10min。
2、不同匀浆组织中 HK 活力不一样，做正式试验之前请做 1-2 只预试，若 A 0.5，则说明
组织活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液（计算公式中乘以相应稀释倍数），
或缩短反应时间 2min,使 A 0.5，以提高检测灵敏度。
HK 活性计算
1、血清（浆）HK 活性
单位的定义：每毫升血清（浆）在每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（nmol/min/mL）＝[ A V 反总 （ε d） 10 9 ] V 样 T=1113 A
2、组织、细菌或细胞中 HK 活性
（1）按样本蛋白浓度计算
单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（nmol/min /mg prot）＝[ A V 反总 （ε d） 10 9 ] (V 样 Cpr) T=1113 A Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（nmol/min /g 鲜重）＝[ A V 反总 （ε d） 10 9 ] (W V 样 V 样总) T=1113 A W
（3）按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（nmol/min /10 4 cell）＝[ A V 反总 （ε d） 10 9 ] (500 V 样 V 样总) T=2.226 A
V 反总：反应体系总体积，1.038 10 -3 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22 10 3 L / mol /cm；
d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.03 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；
T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细
胞总数，500 万。

 相关文献：

《Inhibition of? ?ketoglutarate dehydrogenase activity afects adventitious root growth in?poplar via?changes in?GABA shunt》 作者:Jianyun?Yue,Changjian?Du,Jing?Ji,Tiantian?Xie, Wei?Chen,Ermei?Chang, Lanzhen?Chen, Zeping?Jiang,Shengqing?Shi
 期刊:Planta 影响因子:3.06 PMID:
《lncRNA Ftx promotes aerobic glycolysis and tumor progression through the PPAR pathway in hepatocellular carcinoma》 作者:Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, Wenwen Wang ,Di Zhang ,Zhen Li, Chengyong Qin 期刊:International Journal of Oncology 影响因子:3.571 PMID:29845188
 

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